1.3.2双荧光素酶报告基因实验

参照前期的纸莎实验方法：将HEK293T细胞（人胚肾细胞）培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，并放置于37℃，草的成分含5%CO2的化学细胞培养箱内。细胞接种于24孔板中24h后，研究用Lipofectamine2000转染pNF-κB-luc和pRL-TK质粒后继续培养18h，纸莎加入不同浓度的草的成分待测化合物孵育4h后加入10ng/mLTNF-α再继续培养4h。之后按照双荧光素酶报告基因检测试剂盒说明书检测化合物1~19对NF-κB信号通路活性的化学影响。

2实验结果

2.1化合物结构鉴定

化合物1无色油状物，研究分子式为C15H22O，纸莎分子量218，草的成分22D=+119.1（c0.13，化学CHCl3）。研究1HNMR（600MHz，纸莎CDCl3）δ：4.81（2H，草的成分d，化学J=1.1Hz，H-12），2.77（1H，m，H-8a），2.55（1H，ddd，J=16.9，13.8，5.8Hz，H-3b），2.43（1H，ddd，J=16.9，4.5，3.5Hz，H-3a），2.08（2H，m，H-8a，H-7），1.83（3H，s，H-10），1.82（3H，d，J=1.1Hz，H-13），1.79（2H，m，H-4），1.75（2H，m，H-6b，H-5b），1.65（1H，m，H-6a），1.45（1H，m，H-5a），1.23（3H，s，H-9）；13CNMR（150MHz，CDCl3）δ：199.2（C-3），162.3（C-5），149.2（C-11），128.8（C-4），109.2（C-12），45.9（C-7），41.9（C-9），37.4（C-1），35.8（C-10），33.8（C-2），32.9（C-6），26.9（C-8），22.5（C-15），20.7（C-13），11.0（C-14）。以上数据与文献报道数据基本一致，故鉴定化合物1为α-香附酮。

化合物2无色晶体，分子式为C15H22O2，分子量234，25D=-8.1（c0.25，CHCl3）。1HNMR（600MHz，CDCl3）δ：2.85~2.80（1H，m，H-3b），2.72（1H，m，H-6a），2.69（1H，dd，J=14.5，10.0Hz，H-3a），2.27（1H，m，H-6b），2.06（1H，m，H-10），1.97（1H，m，H-7），1.89（1H，m，H-8a），1.77（1H，m，H-2a），1.55（1H，m，H-2b），1.53（1H，m，H-9a），1.37（1H，m，H-8b），1.11（1H，m，H-9b），0.99（3H，s，H-12），0.87（3H，d，J=6.5Hz，H-15），0.83（3H，s，H-13）；13CNMR（150MHz，CDCl3）δ：173.3（C-5），171.2（C-15），123.2（C-11），68.2（C-1），48.1（C-7），41.7（C-11），36.3（C-3），36.0（C-10），31.3（C-6），27.9（C-9），26.9（C-8），26.2（C-12），25.7（C-2），19.3（C-13），18.0（C-14）。以上数据与文献报道数据基本一致，故鉴定化合物2为香附酸（cyperenoicacid）。

化合物3白色固体，分子式为C15H24O，分子量220，25D=-28.3（c0.033，CHCl3）。1HNMR（600MHz，CDCl3）δ：4.89（1H，d，J=7.0Hz，H-3），2.32（1H，m，H-6a），2.27（1H，dd，J=13.5，6.5Hz，H-2a），2.25（1H，dd，J=13.5，7.0Hz，H-2b），2.24（1H，m，H-6b），2.06（1H，m，H-10），1.99（1H，m，H-7），1.84（1H，m，H-8a），1.61（1H，m，H-9a），1.59（1H，m，H-8b），1.11（1H，m，H-9b），0.98（3H，s，H-12），0.79（3H，s，H-13），0.68（3H，d，J=6.5Hz，H-15）；13CNMR（150MHz，CDCl3）δ：145.6（C-5），130.0（C-4），84.2（C-3），63.0（C-1），47.1（C-7），41.2（C-15），39.3（C-11），34.5（C-10），28.4（C-6），27.8（C-8），27.5（C-9），26.1（C-2），19.4（C-12），18.1（C-13），10.5（C-14）。以上数据与文献报道数据基本一致，故鉴定化合物3为广藿香烯酮。

化合物4白色固体，分子式为C15H24O，分子量220，25D=-22.2（c0.023，CHCl3）。1HNMR（600MHz，CDCl3）δ：5.21-5.18（1H，m，H-3），2.32（1H，d，J=11.7Hz，H-11），2.27~2.15（2H，m，H-2），2.04（1H，dd，J=9.8，6.8Hz，H-1），1.85~1.84（1H，m，H-12），1.68~1.62（1H，m，H-8b），1.61~1.58（1H，m，H-9），1.57~1.48（2H，m，H-7b，H-8a），1.43~1.41（1H，m，H-11），1.16（1H，dd，J=13.2，6.4Hz，H-7a），0.99（3H，s，H-13），0.98（3H，s，H-14），0.93（3H，s，H-15）；13CNMR（150MHz，CDCl3）δ：142.7（C-4），125.1（C-3），75.6（C-6），69.3（C-5），55.1（C-1），49.1（C-9），42.2（C-10），37.7（C-11），36.6（C-7），30.8（C-2），27.6（C-15），26.2（C-14），25.6（C-8），25.4（C-13），16.2（C-12）。以上数据与文献报道数据基本一致，故鉴定化合物4为4,5,6,7,8,8a-六氢-3,4,8,8-四甲基-1H-3a,7-亚甲基甘菊环-4-醇甲酸酯。

化合物5白色固体，分子式为C15H24O，分子量220，25D=+28.2（c0.21，CHCl3）。1HNMR（400MHz，CDCl3）δ：4.29（1H，s，H-6），2.62（1H，m，H-3a），2.24（1H，dd，J=16.2，9.4Hz，H-3b），1.85~1.83（1H，m，H-10），1.82（3H，m，H-15），1.80~1.76（1H，m，H-2b），1.74~1.69（1H，m，H-8b），1.63（1H，t，J=3.4Hz，H-7），1.42（1H，ddd，J=12.8，7.9，0.8Hz，H-2a），1.37~1.30（2H，m，H-8a，H-9b），1.09（3H，s，H-12），0.89（3H，s，H-13），0.85~0.78（1H，m，H-9a），0.82（3H，d，J=6.4Hz，H-14）；13CNMR（100MHz，CDCl3）δ：145.8（C-5），132.3（C-4），73.0（C-6），67.5（C-1），58.3（C-7），42.7（C-3），40.5（C-11），34.9（C-10），28.7（C-9），27.4（C-12），26.4（C-8），26.0（C-2），20.2（C-13），17.8（C-14），14.6（C-15）。以上数据与文献报道数据基本一致，故鉴定化合物5为(6S)4-烯-广藿香醇。

化合物6白色固体，分子式为C15H24，分子量204，25D=+30.2（c0.35，CHCl3）。1HNMR（400MHz，CDCl3）δ：5.44（1H，m，H-3），4.71（2H，m，H-12），2.77（1H，m，H-8a），2.08（2H，m，H-8b，H-7），1.83（1H，s，H-10），1.75（2H，m，H-6b，H-5b），1.73（3H，d，J=1.1Hz，H-13），1.65（1H，m，H-6a），1.66（3H，s，H-14），1.45（1H，m，H-5a），1.23（3H，s，H-14），0.99（3H，s，H-15）；13CNMR（100MHz，CDCl3）δ：153.2（C-4），149.1（C-11），122.1（C-3），105.4（C-12），49.2（C-7），42.4（C-6），34.4（C-5），31.1（C-10），30.7（C-9），28.7（C-15），27.8（C-1），25.9（C-2），22.1（C-8），22.0（C-14），21.6（C-13）。以上数据与文献报道数据基本一致，故鉴定化合物6为桉烷双烯萜。

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